Современные представления о клеточных основах гемо- и лимфопоэза

К 100-летию унитарной теории кроветворения А.А. Максимова

Многостадийный процесс кроветворения, завершающийся выходом в циркулирующую кровь зрелых клеточных форм (эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов), поддерживается заложенными в онтогенезе стволовыми кроветворными клетками (СКК).
В результате пролиферации СКК, выходящих из состояния покоя, и их последующей дифференцировки, направление которой выбирается стохастически, появляются сменяющие друг друга дочерние клоны коммитированных клеток-предшественников, из которых затем образуются морфологически распознаваемые клетки различных ростков гемо- и лимфопоэза.
Признание существования единой полипотентной гемопоэтической стволовой клетки (ПГСК) послужило основой для создания современной схемы кроветворения, представленной практически одновременно, в 1971-1973 гг., Mathe с соавт., И.Л. Чертковым и А.И. Воробьевым, Metcalf и Moore. ПГСК обладают такими основными характеристиками: способностью к длительному самоподдержанию, высоким пролиферативным потенциалом, способностью к дифференцировке в клеточные элементы различных линий миело- и лимфопоэза.
Содержание СКК в костном мозге человека в постнатальном периоде невелико – лишь несколько десятых долей процента от общего количества миелокариоцитов. В норме основная масса СКК (95%) находится в фазе клеточного цикла G₀. Количество делящихся СКК резко увеличивается при регенерации костного мозга после лучевого повреждения или действия цитостатических препаратов.

Гетерогенность популяции СКК
Длительное время ПГСК отождествлялись с клетками, образующими колонии в селезенке облученных мышей (КОЕ-С), описанными Till и McCulloch. В последующем из этой гетерогенной клеточной популяции были выделены КОЕ-С8, генерирующие макроскопически видимые колонии в селезенке через 8 дней после трансплантации и не продуцирующие дочерние КОЕ-С, и КОЕ-С12, образующие селезеночные колонии через 12 дней после введения реципиенту и обладающие высоким пролиферативным потенциалом. Считается, что часть КОЕ-С12 способны к долговременному поддержанию кроветворения. При помощи различных модельных систем были идентифицированы и частично охарактеризованы и другие клетки, обладающие свойствами, присущими ПГСК: колониеобразующие клетки с высоким пролиферативным потенциалом (КОЕ-ВПП), колониеобразующие единицы бластов (КОЕ-Бл), клетки, инициирующие долговременные культуры костного мозга (КИ-ДККМ). Все эти клеточные элементы, которые пытаются представить в виде определенной иерархической последовательности, относятся к классу (отделу) полипотентных клеток. ПГСК дают начало классу несамообновляющихся полиолигопотентных клеток-предшественников (общему предшественнику миелопоэза – миелоидной стволовой клетке и общему предшественнику лимфопоэза – лимфоидной стволовой клетке), которые, в свою очередь, продуцируют клетки-предшественники третьего класса (отдела) с еще более ограниченным дифференцировочным потенциалом, и, наконец, морфологически распознаваемым родоначальным бластным клеткам различных линий.
Согласно широко известной схеме кроветворения, предложенной И.А. Чертковым и А.И. Воробьевым, лимфоидная стволовая клетка дает начало развитию В- и Т-лимфоцитов, и, вероятно, естественных клеток-киллеров (ЕК-клеток). Из клетки-предшественника миелопоэза – колониеобразующей единицы гранулоцитов, эритроцитов, моноцитов, мегакариоцитов (КОЕ-ГЭММег) – возникают миеломоноцитарные клетки-предшественники (КОЕ-ГМ), которые, в свою очередь, отвечают за выработку гранулоцитов, моноцитов/макрофагов, клеток-предшественников мегакариоцитарного (КОЕ-Мег) и эритробластического (БОЕ-Э, КОЕ-Э) ряда. Как показано в последнем (2005 г.) варианте схемы кроветворения, дендритные клетки возникают как из общей клетки-предшественника миелопоэза, так и из общей клетки-предшественника лимфопоэза. При этом источником развития тучных клеток служит КОЕ-Г, относящаяся к классу (отделу) моноолигопотентных коммитированных клеток-предшественников, в который входят также КОЕ-Э, КОЕ-М, КОЕ-Мег, пре-Т- и пре-В-клетки.
Со времени создания схемы кроветворения И.А. Черткова и А.И. Воробьева прошло почти 35 лет. За этот период накопились новые экспериментальные и клинические данные, которые в случае их подтверждения, возможно, также найдут свое место в указанной схеме. Это в первую очередь касается возможного общего предшественника мегакариоцитов/эритроцитов и В-лимфоцитов/моноцитов, о чем косвенно свидетельствует возможность трансформации острого лимфобластного лейкоза из В-клеток-предшественников в острый монобластный лейкоз при рецидиве заболевания. Не исключено, что может существовать общий предшественник ЕК-клеток и моноцитов. В то же время, несмотря на наличие ЕК- и Т-клеточного подвариантов лейкоза из больших гранулосодержащих лимфоцитов (БГЛ) и то, что начальные этапы дифференцировки ЕК-клеток проходят в тимусе, вероятность выявления общего предшественника Т- и ЕК-клеток представляется маловероятной.
В свете обсуждаемой проблемы заслуживает внимания вопрос о реальном существовании и частоте так называемых бифенотипических, или гибридных, форм острых лейкозов.

Цитоморфологические и цитохимические признаки родоначальных кроветворных клеток
В опубликованной в 1978 г. монографии З.А. Бутенко были подытожены данные о цитоморфологических признаках предполагаемых «кандидатов» в стволовые гемопоэтические клетки. Была показана гетерогенность родоначальных кроветворных клеток, которые с учетом их пролиферативной активности и нахождения в различных фазах клеточного цикла представлены спектром мононуклеаров – от малых лимфоцитоподобных и моноцитоидных клеток до недифференцированных бластов. По мнению М.Г. Абрамова, отдельные категории родоначальных клеточных элементов, входящих в первые три класса (отдела) схемы кроветворения И.А. Черткова и А.И. Воробьева, не удается идентифицировать с помощью общепринятых методов из-за сходства их цитоморфологических признаков. При изучении окрашенных обычными методами гематологических препаратов их относят к лимфоидным элементам или бластам.
Нами была предпринята попытка цитологического и цитохимического изучения ПГСК и гемопоэтических клеток-предшественников.
Наряду с анализом клеточного состава селезеночных колоний, возникающих у летально облученных мышей после трансплантации клеток костного мозга, наименее дифференцированных клеток в составе гранулоцитарных и моноцитарно/макрофагальных колоний и кластеров при росте на полутвердых средах in vitro, плодотворным оказалось исследование ранних этапов эмбрионального кроветворения у человека и мышей, особенно первых кроветворных клеток в желточном мешке, мигрировавших затем в печень и заселявших костный мозг, селезенку, тимус и лимфатические узлы.
Результаты исследований убедительно показали, что считавшиеся морфологически неидентифицируемыми кроветворные клетки-предшественники II-III классов (в схеме И.А. Черткова и А.И. Воробьева), не говоря о морфологически распознаваемых бластных клетках, обладают маркерными цитохимическими признаками, присущими зрелым клеткам того или иного ростка гемопоэза. Как известно, для клеток гранулоцитарного ростка таковыми являются положительная реакция при выявлении активности миелопероксидазы и хлорацетатэстеразы; для клеток моноцитарно/макрофагального ряда – высокая активность α-нафтилацетатэстеразы и кислой неспецифической эстеразы; для клеток мегакариоцитарного ряда – положительная реакция при определении активности ацетилхолинэстеразы. Кроме того, были установлены различия между клетками-предшественниками В- и Т-лимфоцитов при цитохимическом определении активности кислой фосфатазы и β-глюкуронидазы. Эти данные наряду с результатами биохимических исследований И.Ф. Сейца и И.С. Лугановой (1967) можно рассматривать в качестве ретроспективного теоретического обоснования использования цитохимических методов, которые ранее применялись эмпирически, для выделения различных форм и цитологических вариантов острых лейкозов миелоидной и лимфоидной природы, возникающих в результате трансформации и клональной пролиферации различных категорий кроветворных клеток-предшественников.

Иммунофенотипическая характеристика кроветворных и лимфоидных клеток на разных стадиях дифференцировки
В связи с широким применением в диагностике ряда основных форм гемобластозов методов иммуноцитохимии и иммунофенотипирования на основе проточной цитофлуориметрии с использованием стандартных панелей моноклональных антител кратко остановимся на результатах изучения линейноспецифических и дифференцировочных антигенов кроветворных и лимфоидных клеток человека.
Поверхностные маркеры полипотентных гемопоэтических стволовых клеток
По данным ряда лабораторий, в норме иммунофенотип ПГСК имеет такой вид: CD34+ CD90+ CD38- CD123- CD117+. Популяция CD34+ клеток включает СКК и практически все определяемые in vitro гемопоэтические колониеобразующие клетки, а также ранние предшественники Т- и В-лимфоцитов. Она составляет 1-5% ядросодержащих клеточных элементов костного мозга и представлена клетками, имеющими цитоморфологические признаки бластов или малых лимфоцитов. Антиген CD34 представляет собой высокогликозилированный трансмембранный белок типа I (сиаломуцин) с молекулярной массой 116 кД. Он экспрессируется на СКК, ранних кроветворных клетках-предшественниках (КОЕ-ГЭММег, БОЕ-Э, КОЕ-ГМ, КОЕ-Мег), эндотелии сосудов, эмбриональных фибробластах, гемопоэтических клетках-предшественниках из желточного мешка и печени эмбриона, некоторых клетках нервной ткани. Функция антигена CD34 окончательно не выяснена; имеются предположения, что он играет важную роль в гемопоэзе и может принимать участие во взаимодействии стромальных и кроветворных клеток. В настоящее время антиген CD34 признан одним из важнейших маркеров ПГСК и широко используется для выявления, обогащения и очистки стволовых клеток и гемопоэтических клеток-предшественников костного мозга человека. Линейная коммитация клеток-предшественников сопровождается снижением уровня экспрессии антигена CD34. Более дифференцированные клетки-предшественники – эритроцитарные, гранулоцитарные, моноцитарные – являются CD34-отрицательными или характеризуются слабой экспрессией данного антигена. На поверхностных мембранах зрелых клеток костного мозга и крови антиген CD34 не обнаруживается.
Согласно имеющимся данным антиген Thy-1 (CD90) с молекулярной массой 25-35 кД, относящийся к семейству IgSF, также идентифицирует популяцию полипотентных клеток-предшественников, включающую и ПГСК, в костном мозге человека. Экспрессия антигена Thy-1 ограничена небольшой субпопуляцией (10-40%) CD34+ клеток костного мозга и менее чем 1% CD3+ CD4+ лимфоцитов. В большинстве своем Thy-1+ CD34+ клетки костного мозга не экспрессируют дифференцировочные маркеры, указывающие на коммитацию в определенном направлении. Установлено, что Thy-1+ CD34+ клетки способны инициировать и поддерживать рост долговременных культур костного мозга, содержащих как коммитированные клетки (миелоидные, эритроидные, мегакариоцитарные клетки-предшественники и клетки-предшественники В-лимфоцитов), так и некоммитированные дочерние клетки. В то же время Thy-1 CD34+ клетки практически не способны инициировать долговременные мультилинейные культуры.
ПГСК являются CD38-отрицательными. Антиген CD38 – одноцепочечная трансмембранная молекула типа II с молекулярной массой 45 кД. Он представляет собой фермент АДФ-рибозилциклазу, определяющий процесс поступления циклической АДФ-рибозы в клетку. Антиген CD38 экспрессируется на большинстве гемопоэтических клеток на ранних стадиях дифференцировки и при активации. Отмечено, что CD34+ CD38- популяция миелокариоцитов обогащена примитивными гемопоэтическими стволовыми клетками, имеющими как миелоидный, так и лимфоидный дифференцировочный потенциал. В долговременных культурах костного мозга из них образовывались клетки всех ростков кроветворения: нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, моноциты, мегакариоциты, эритроциты и В-лимфоциты.
Линейная коммитация ПГСК ассоциирована с повышением уровня антигена CD38 и снижением экспрессии антигена CD34. На ПГСК не определяются антигены гистосовместимости II класса (HLA-DR). В то же время большинство коммитированных кроветворных клеток-предшественников (КОЕ-ГЭММег, КОЕ-ГМ, БОЕ-Э, КОЕ-Мег) содержится в популяции CD34+HLA-DR+ клеток.
На ПГСК и гемопоэтических клетках-предшественниках экспрессируется антиген CD117 с молекулярной массой 145 кД – рецептор тирозинкиназы ІІІ типа, относящийся к семейству IgSF, опосредующий адгезию клеток и участвующий в регуляции пролиферации и дифференцировки стволовых и тучных клеток.
Данные иммуноцитохимических исследований свидетельствуют о неоднородности популяции CD34+ клеток, определяющихся в костном мозге человека в постнатальном периоде. Наиболее примитивные некоммитированные ПГСК имеют фенотип CD34+ Thy-1+ CD38- HLA-DR- CD90+ CD123- CD117+ CD45RO+ CD45RA-/low CD71-/low. На них возможна экспрессия некоторых миелоидных и лимфоидных дифференцировочных антигенов – CD33, CD13, CD15, CD4, CD7. В костном мозге здоровых людей-доноров идентифицированы отдельные субпопуляции клеток, экспрессирующих эти антигены: CD34+ Thy-1+ CD38- CD33+; CD34+ CD38-/low CD13+; CD34+ CD15+; CD34+ Thy-1+ CD38-/low CD71low HLA-DR+/low CD4+; CD34+ CD7+. Пока неизвестно, является ли наличие указанных субпопуляций отражением начальных этапов коммитации, результатом нахождения в различных фазах клеточного цикла, следствием индукционного воздействия. Можно лишь отметить, что указанные антигены чаще выявляются на клетках-предшественниках, коммитированных в миелоидном (CD33, CD13, CD15) или лимфоидном (CD7) направлениях.
В научном и практическом плане важно сравнить иммунофенотипические особенности нормальных ПГСК и недавно идентифицированных стволовых лейкемических клеток (ЛСК). Этому предшествовало установление клональной природы хронического миелолейкоза (ХМЛ) и острого миелобластного лейкоза (ОМЛ). Согласно полученным данным лейкемические клетки, образующие инфильтраты в костном мозге и других органах и определяющиеся в крови, являются потомками одной клетки, подвергшейся злокачественной трансформации (предположительно ПГСК или коммитированной клетки-предшественника). Экспериментальные доказательства существования подобных клоногенных клеток, или ЛСК, были получены в 1997 г. в опытах по гетеротрансплантации на мышах с выраженным комбинированным иммунодефицитом (SCID) и мышах NOD/SCID (Dick; Weissman et al.). Последние были получены путем скрещивания нетучных диабетических мышей (NOD) и мышей с SCID. Мыши с SCID не имеют В- и Т-лимфоцитов, а у мышей NOD не определяется активность ЕК-клеток и наблюдаются другие типы иммунодефицита – дефекты активности макрофагов и активации комплемента.
При трансплантации лейкемических клеток костного мозга и периферической крови больных с различными ФАБ-типами ОМЛ было четко показано, что большинство лейкозных бластов не способны к пролиферации. Клональными свойствами обладали лишь способные к самоподдержанию ЛСК, содержащиеся во фракции CD34+CD38- клеток, доля которых у больных с различными формами ОМЛ варьирует от 0,2 до 1%.
В настоящее время получены доказательства, что ряд форм ОМЛ, за исключением ОМЛ М3, и ХМЛ возникают вследствие мутаций, накапливающихся в ПГСК. Предполагают, что ЛСК могут возникать также из коммитированных клеток-предшественников (лимфоидной СК, КОЕ-ГМ, мегакариоцитарно-эритроидных предшественников) в результате мутации и/или селективной экспрессии генов, усиливающих присущую им способность к самоподдержанию. Установлено, что лейкемические стволовые клетки имеют следующие иммунофенотипические признаки: при острых миелоидных лейкозах – CD34+ CD38- CD90- CD123+ CD117- CD71- HLA-DR-; при острых лимфобластных лейкозах – CD34+ CD38- Lin- CD10- CD19-.
Стволовые миелоидные клетки, или клоногенные общие миелоидные предшественники, и их ближайшие потомки – гранулоцитарно/макрофагальные и мегакариоцитарно/эритроидные клетки-предшественники в костном мозге взрослых людей содержатся во фракции Lin- CD34+ CD38+ клеток. На поверхностных мембранах этих клеток экспрессируются α-цепи рецептора ИЛ-3, антиген HLA-DR и CD45RA (одна из изоформ общего лейкоцитарного антигена), участвующий в качестве рецептора протеинтирозинфосфатазы в регуляции сигналов, опосредуемых цитокинами.
При росте на метилцеллюлозе клетки с указанным фенотипом образуются различного типа миелоидные колонии, содержащие КОЕ-ГЭММег, БОЕ-Э, КОЕ-Мег, КОЕ-ГМ, КОЕ-Г и КОЕ-М.
На сегодня нет обобщенных данных о функциональной роли определяемых на поверхностных мембранах СКК и клеток-предшественников вновь открытых антигенов, вошедших в классификацию антигенов лейкоцитов человека после VII (Харрогейт, Великобритания, 2000) и VIII (Аделаида, Австралия, 2004) Рабочих совещаний по типированию лейкоцитов. Из общего числа идентифицированных к 2004 г. 339 дифференцировочных молекул (CD) человека на определенных субпопуляциях родоначальных кроветворных клеток обнаружены антигены CD172a, CD173, CD174, CD175, CD176, CD183, CD195, CD213a1, CD213a2, CD224, CD227, CD230, CD238, CD239, CD243. Предстоит выяснить, могут ли они быть использованы в качестве маркеров ПГСК или различных категорий нормальных и лейкозно трансформированных кроветворных клеток-предшественников.

Иммунофенотип клеток гранулоцитарно-моноцитарного ряда на разных стадиях дифференцировки
Дифференцировка клеток-предшественников гранулоцитов-макрофагов характеризуется последовательным появлением следующих антигенов. Антиген CD13 (аминопептидаза N, КФ 3.4.11.2), мембранносвязанный белок с молекулярной массой 150 кД из семейства цинк-активируемых металлопептидаз, экспрессирован на поверхности ранних клеток-предшественников (КОЕ-ГМ) на всех стадиях созревания клеток гранулоцитарного и моноцитарного ряда. Антиген может обнаруживаться и на СКК, более ранних миелоидных клетках-предшественниках (КОЕ-ГЭММег), клетках- предшественниках лимфоцитов и, следовательно, не является специфическим маркером гранулоцитарно-макрофагального направления дифференцировки.
Антиген CD33 (гликопротеин с молекулярной массой 67 кД, относящийся к семейству сиалоадгезинов) обнаруживается на миелоидных клетках-предшественниках типа КОЕ-ГЭММег, КОЕ-ГМ, КОЕ-Г, БОЭ-Э, моноцитах/макрофагах, незрелых клетках гранулоцитарного ряда.
Антиген CD64 (Fc-рецептор IgG) с молекулярной массой 72 кД определяет бифенотипическую популяцию клеток-предшественников гранулоцитов-макрофагов. Экспрессирован также на моноцитах, макрофагах, субпопуляции дендритных клеток крови, зародышевых центрах лимфоидных фолликулов, молодых и незрелых клетках гранулоцитарного ряда.
Вслед за антигеном CD64 на бипотентных клетках-предшественниках гранулоцитов-макрофагов появляется антиген CD15. На поверхностных мембранах этих клеток определяются антигены CD116 (рецептор колониестимулирующего фактора гранулоцитов-макрофагов – КСФ-ГМ), CD115 (рецептор КСФ-М) и CD114 (рецептор КСФ-Г).
Последующие стадии дифференцировки клеток-предшественников гранулоцитарного ряда характеризуются наличием на поверхностных мембранах клеток антигена CD35 (рецептор C3b компонента комплемента); CD88 (рецептор C5a компонента комплемента); рецепторов к Fc-фрагментам иммуноглобулинов – CD32 (Fc γ-RII), CD89 (Fc α-R); молекул адгезии CD66α-f (членов группы раковоэмбриональных антигенов); антигенов CD11b, CD11c, относящихся к семейству интегринов и участвующих в межклеточных взаимодействиях; углеводных антигенов CDw17 (лактозилдисахаридная группа лактозилцерамида), CD43 (сиалогликопротеин с молекулярной массой 95-105 кД), CD65 и CD65s (соответственно десиалированный и сиалированный VIM-2-декасахариды, относящиеся к семейству поли-N-ацетиллактозаминов), антигенов CDw92, CDw93 (О-сиалогликопротеин с молекулярной массой 120 кД).
На поздних стадиях дифференцировки клеток гранулоцитарного ряда на их поверхностных мембранах отмечается дополнительная экспрессия антигенов CDw12, CD24, CD87 (рецептор активатора плазминогена урокиназы – uPAR), CD123 (α-субъединица рецептора ИЛ-3), CDw128a и CDw128b (рецепторы ИЛ-8 типа А и В). Антиген CDw125 (α-цепь рецептора ИЛ-5) экспрессирован на эозинофилах, базофилах и отсутствует на нейтрофилах.
Маркером родоначальных и незрелых клеток моноцитарно/макрофагального ряда считается антиген CD14 (рецептор липополисахарида с молекулярной массой 55 кД). В процессе созревания клеток этого ряда происходит постоянное повышение уровня экспрессии антигена CD14. В ходе последующей дифференцировки на поверхностных мембранах клеток выявляются антигены CD11b, CD11c, CDw12, CD17, CD35, CD68.
На поверхностных мембранах моноцитов крови, гистиоцитов и макрофагов определяется экспрессия таких антигенов, как HLA-DR, CD11b, CD11c, CD49 α-f (α-цепи интегринов), CDw12, CD13, CD14, CD15, CD17, CD32, CD33, CD35, CD64, CD68, CD84, CD87, CD89, CD91 (рецептор α-2-макроглобулина), CDw92, CDw93, CD101, CD102 (молекулы межклеточной адгезии – ICAM-2), CD115 (рецептор КСФ-1), CD116, CDw119 (рецептор α-цепи γ-интерферона), CD121a, CD121b (рецепторы ИЛ-1 типа 1 и 2), CD123 (α-субъединица рецептора ИЛ-3), CD127 (α-цепь рецептора ИЛ-7), CDw128a, CDw128b (рецепторы ИЛ-8 типа А и В), CD132, CD135.

Иммунофенотип клеток мегакариоцитарного ряда на разных стадиях дифференцировки
На поверхностных мембранах ранних клеток-предшественников мегакариоцитарного ряда (БОЕ-Мег и КОЕ-Мег) экспрессируется антиген CD34. В процессе дифференцировки появляется антиген CD61 (β3-цепь интегрина), считающийся специфическим маркером клеток мегакариоцитарного ряда. Появление антигена CD41 (гликопротеин IIb с молекулярной массой 120 кД) на промегакариобластах предшествует процессу полиплоидизации клеток мегакариоцитарного ряда. Антиген CD41 отсутствует на CD34+ ранних клетках-предшественниках мегакариоцитов, его наличие на клетках типа КОЕ-Мег окончательно не доказано. Антигены CD42a (молекулярная масса 17-22 кД), CD42b (145 кД), CD42с (24 кД) и CD42d (82 кД) экспрессированы исключительно на мегакариоцитах и тромбоцитах.

Иммунофенотип клеток эритробластического ряда на разных стадиях дифференцировки
Наиболее ранним эритроидным клеткам-предшественникам присущ следующий фенотип: CD34+ HLA-DR+ CD45RO+ CD33+ CD71low CD175s+. На ранних этапах дифференцировки, начиная с БОЕ-Э, появляется антиген CD36, который экспрессируется до стадии ретикулоцита. В процессе дифференцировки ядросодержащих клеток эритробластического ряда происходит повышение уровня экспрессии антигена CD71 (рецептора трансферрина) при одновременном снижении экспрессии антигена CD34. Гликофорин А является достаточно поздним маркером клеток эритробластического ряда, его экспрессия на поверхностных мембранах клеток определяется со стадии эритробласта.
Наиболее ранние клоногенные лимфоидные клетки-предшественники в костном мозге взрослого человека и кордовой крови характеризуются коэкспрессией на Lin- CD34+ CD38+ клетках антигенов CD10 или CD7. Первые из них дают начало В- и Т-лимфоцитам, естественным клеткам-киллерам и дендритным клеткам, из CD34+ CD38- CD7+ клеток возникают В-лимфоциты, ЕК-клетки и дендритные клетки. Оба типа клеток не обладают способностью дифференцироваться в клеточные элементы миело- и эритропоэза.

Иммунофенотип В-лимфоцитов на стадиях антигеннезависимой дифференцировки
Наиболее ранним эритроидным клеткам-предшественникам присущ следующий фенотип: CD34+ HLA-DR+ CD45RO+ CD33+ CD71low CD175s+. На ранних этапах дифференцировки, начиная с БОЕ-Э, появляется антиген CD36, который экспрессируется до стадии ретикулоцита. В процессе дифференцировки ядросодержащих клеток эритробластического ряда происходит повышение уровня экспрессии антигена CD71 (рецептора трансферрина) при одновременном снижении экспрессии антигена CD34. Гликофорин А является достаточно поздним маркером клеток эритробластического ряда, его экспрессия на поверхностных мембранах клеток определяется со стадии эритробласта.
Наиболее ранние клоногенные лимфоидные клетки-предшественники в костном мозге взрослого человека и кордовой крови характеризуются коэкспрессией на Lin- CD34+ CD38+ клетках антигенов CD10 или CD7. Первые из них дают начало В- и Т-лимфоцитам, естественным клеткам-киллерам и дендритным клеткам, из CD34+ CD38- CD7+ клеток возникают В-лимфоциты, ЕК-клетки и дендритные клетки. Оба типа клеток не обладают способностью дифференцироваться в клеточные элементы миело- и эритропоэза.

Иммунофенотип В-лимфоцитов на стадиях антигеннезависимой дифференцировки
Дифференцировка В-лимфоцитов от ранних клеток-предшественников до плазматических клеток-продуцентов различных классов иммуноглобулинов (Ig) проходит в два этапа. Первый этап – антигеннезависимой дифференцировки – осуществляется в первичных органах лимфопоэза (в эмбриональной печени и костном мозге в постнатальный период). Он завершается образованием «девственных» (virgin) В-клеток, находящихся в G₀, несущих на поверхностных мембранах молекулы Ig различных классов. Из костного мозга В-лимфоциты мигрируют во вторичные лимфоидные органы (лимфатические узлы, очаги лимфоидной ткани, располагающиеся под слизистой оболочкой органов желудочно-кишечного тракта и дыхательных путей). Там осуществляется этап их антигензависимой дифференцировки, завершающийся образованием клонов антителообразующих клеток и клеток иммунологической памяти.
Содержание лимфоидных клеток-предшественников – гематогоний – особенно велико в костном мозге новорожденных и детей раннего возраста. Оно может увеличиваться при регенерации костного мозга после проведения химио- или лучевой терапии. По цитоморфологическим признакам и иммунофенотипу гематогонии напоминают лимфобласты при остром лимфолейкозе. Они имеют узкий ободок цитоплазмы, округлые ядра с нежной структурой хроматина, отличной от конденсированной в более зрелых лимфоидных клетках. Ядрышки трудно различимы или отсутствуют. Иммунофенотип гематогоний на наиболее ранних стадиях созревания – CD19+ CD20- CD10+ TdT+, на более поздних – CD19+ CD20+ CD10- TdT-.
Про-В-клетка – ближайший потомок стволовой лимфоидной клетки, в которой еще не произошла перестройка генов Ig и не экспрессируются линейные В-клеточные маркеры. Интенсивная пролиферация этих клеток, располагающихся между синусами костного мозга, происходит вблизи эндоста. При перемещении в центральные участки костного мозга они взаимодействуют со стромальными клетками и компонентами внеклеточного матрикса. Межклеточные взаимодействия осуществляются с участием экспрессированных на про-В-клетках молекул адгезии CD44 и VLA-4 и вырабатываемых стромальными клетками kit-лиганда, ИЛ-3 и ИЛ-7. На поверхностных мембранах про-В-клеток наблюдается последовательная экспрессия антигенов HLA-DR, В-клеточного антигена CD19, антигенов CD24, CD72, CD81, CD124, CD127, CD135, а в ядрах определяется фермент – терминальная дезоксинуклеотидилтрансфераза (TdT). На этой же стадии дифференцировки про-В-клеток на поверхностных мембранах клеток отмечается экспрессия В-клеточных линейноспецифических антигенов CD79a, CD79b. В цитоплазме про-В-клеток вскоре после начала экспрессии CD19 появляется антиген CD22.
Стадия развития клеток-предшественников В-лимфоцитов, определяемая как пре-В-клетки, характеризуется реарранжировкой генов тяжелых цепей Ig и экспрессией m-тяжелых цепей Ig в цитоплазме. На поверхностных мембранах пре-В-клеток определяются антигены CD10, CD19, CD20, CD22, CD24, CD38, CD40, CD72, CD74, CD79a, CD79b, CD81, CD124, CD127, CD135, CD138, CD139.
Для ранних В-клеток следующей стадии дифференцировки В-лимфоцитов характерен синтез тяжелых μ-цепей, κ- и λ-легких цепей с образованием полных молекул IgM, экспрессирующихся на поверхностных мембранах клеток. Одновременно в клетках синтезируется еще один тип тяжелых цепей δ-, на поверхностных мембранах одновременно определяются IgM и IgD. На этой стадии в цитоплазме временно не экспрессируется антиген CD10, синтез которого возобновляется в В-клетках зародышевых центров лимфоидных фолликулов вторичных органов лимфопоэза. На мембранах ранних В-клеток и на последующей стадии дифференцировки В-лимфоцитов, так называемых промежуточных В-клетках, определяются антигены CD19, CD20, CD22, CD24, CD32, CD35, CD40, CD48, CD52, CD72, CD74, CD79a, CD79b, CD99, CD124.
Антигензависимая дифференцировка В-клеток – новый цикл их развития – происходит в тимуснезависимых зонах вторичных лимфоидных органов. Вызываемая антигеном активация и последующая дифференцировка В-клеток приводит к образованию антителообразующих клеток или появлению фенотипически и функционально обособленной популяции долгоживущих В-клеток памяти. Эти процессы происходят под влиянием индуктивного микроокружения вторичных лимфоидных органов (внеклеточного матрикса, стромальных клеток, Т-лимфоцитов, дендритных клеток зародышевых центров лимфоидных фолликулов), с участием цитокинов и молекул клеточной адгезии.

Цитоморфологические признаки и иммунофенотип клеток лимфатических узлов
В структуре лимфатического узла выделяют корковую часть, включающую фолликулы (первичные и вторичные), паракортикальную зону, мякотные шнуры и синусы.
Клетки первичных фолликулов представлены малыми В-лимфоцитами (CD19+ CD20+ CD22+), экспрессирующими поликлональные IgM и IgD (содержащие κ- и λ-легкие цепи). В них обнаруживаются также фолликулярные дендритные клетки (ФДК) с фенотипом CD21+ CD23+ CD35+, относящиеся к категории антигенпрезентирующих клеток.
Вторичные фолликулы состоят из зародышевого центра, начало которому дают В-лимфоциты, подвергшиеся трансформации в IgM+ бласты в паракортикальной зоне, и мантийной зоны, представленной клетками, по цитоморфологическим признакам идентичным обнаруживаемым в первичных фолликулах. IgM+ бласты дифференцируются в sIg-отрицательные центробласты (крупные клетки зародышевых центров фолликулов с нерасщепленным ядром). Ядра центробластов округлой или овальной формы содержат 1-3 ядрышка, локализованные у ядерной мембраны. В клетках этого типа определяется узкий ободок базофильной цитоплазмы. Центробласты дифференцируются в центроциты (клетки центров фолликулов с расщепленным ядром), являющиеся лимфоидными клетками малых или средних размеров со скудной цитоплазмой, в ядрах которых не визуализируются нуклеолы. На поверхностных мембранах центроцитов экспрессируются IgG и IgA. Центроциты могут дифференцироваться в В-клетки памяти или плазматические клетки.
В-клетки, покидающие зародышевый центр, образуют маргинальную зону вокруг периферии мантийной зоны. Клетки маргинальной зоны представлены малыми клетками с ядрами несколько неправильной формы и умеренно широкой цитоплазмой. В маргинальной зоне обнаруживаются моноцитоидные В-клетки, прежде считавшиеся незрелыми гистиоцитами синусов, с относительно крупными овальными или бобовидной формы ядрами и обширной светлой цитоплазмой.
Паракортикальная зона, располагающаяся между фолликулами и распространяющаяся вглубь лимфатического узла, служит местом активации Т-клеток, которые при этом превращаются из малых лимфоцитов в иммунобласты, и В-клеток, происходящей без участия Т-лимфоцитов. При изучении гистологических срезов в паракортикальной зоне выявляются малые лимфоциты, варьирующее количество иммунобластов, интердигитирующие дендритные клетки (ИДК) – антигенпрезентирующие клетки в этой зоне лимфатического узла. ИДК имеют бледно окрашивающиеся ядра овальной или удлиненной формы, иногда с инвагинациями довольно сложной конфигурации, и широкую цитоплазму. При иммуноцитохимическом исследовании в них определяется белок S-100 и антиген HLA-DR.
В паракортикальной зоне обнаруживаются венулы с высоким эндотелием, играющим важную роль в рециркуляции лимфоцитов. Содержащиеся в паракортикальной зоне лимфоциты и некоторые иммунобласты имеют иммунофенотип зрелых Т-клеток (CD2+ CD3+ CD5+ CD1- TdT-). Количество CD4+ лимфоцитов превышает количество CD8+ клеток.
В мякотных шнурах содержатся малые лимфоциты, лимфоциты с признаками плазматизации, иммунобласты, плазматические клетки. Лишь немногие лимфоциты представлены Т-клетками, большинство из них имеет В-клеточное происхождение и характеризуется экспрессией различных классов иммуноглобулинов (IgM, IgD, IgA).
Синусы лимфатического узла (субкапсулярные, кортикальные, медуллярные), в которые через афферентные лимфатические сосуды поступает и из которых через эфферентные вытекает лимфа, содержат гистиоциты синусов и небольшое количество малых лимфоцитов.

Иммунофенотип Т-лимфоцитов на разных стадиях дифференцировки
Дифференцировка В-лимфоцитов от ранних клеток-предшественников до плазматических клеток-продуцентов различных классов иммуноглобулинов (Ig) проходит в два этапа. Первый этап – антигеннезависимой дифференцировки – осуществляется в первичных органах лимфопоэза (в эмбриональной печени и костном мозге в постнатальный период). Он завершается образованием «девственных» (virgin) В-клеток, находящихся в G₀, несущих на поверхностных мембранах молекулы Ig различных классов. Из костного мозга В-лимфоциты мигрируют во вторичные лимфоидные органы (лимфатические узлы, очаги лимфоидной ткани, располагающиеся под слизистой оболочкой органов желудочно-кишечного тракта и дыхательных путей). Там осуществляется этап их антигензависимой дифференцировки, завершающийся образованием клонов антителообразующих клеток и клеток иммунологической памяти.
Содержание лимфоидных клеток-предшественников – гематогоний – особенно велико в костном мозге новорожденных и детей раннего возраста. Оно может увеличиваться при регенерации костного мозга после проведения химио- или лучевой терапии. По цитоморфологическим признакам и иммунофенотипу гематогонии напоминают лимфобласты при остром лимфолейкозе. Они имеют узкий ободок цитоплазмы, округлые ядра с нежной структурой хроматина, отличной от конденсированной в более зрелых лимфоидных клетках. Ядрышки трудно различимы или отсутствуют. Иммунофенотип гематогоний на наиболее ранних стадиях созревания – CD19+ CD20- CD10+ TdT+, на более поздних – CD19+ CD20+ CD10- TdT-.
Про-В-клетка – ближайший потомок стволовой лимфоидной клетки, в которой еще не произошла перестройка генов Ig и не экспрессируются линейные В-клеточные маркеры. Интенсивная пролиферация этих клеток, располагающихся между синусами костного мозга, происходит вблизи эндоста. При перемещении в центральные участки костного мозга они взаимодействуют со стромальными клетками и компонентами внеклеточного матрикса. Межклеточные взаимодействия осуществляются с участием экспрессированных на про-В-клетках молекул адгезии CD44 и VLA-4 и вырабатываемых стромальными клетками kit-лиганда, ИЛ-3 и ИЛ-7. На поверхностных мембранах про-В-клеток наблюдается последовательная экспрессия антигенов HLA-DR, В-клеточного антигена CD19, антигенов CD24, CD72, CD81, CD124, CD127, CD135, а в ядрах определяется фермент – терминальная дезоксинуклеотидилтрансфераза (TdT). На этой же стадии дифференцировки про-В-клеток на поверхностных мембранах клеток отмечается экспрессия В-клеточных линейноспецифических антигенов CD79a, CD79b. В цитоплазме про-В-клеток вскоре после начала экспрессии CD19 появляется антиген CD22.
Стадия развития клеток-предшественников В-лимфоцитов, определяемая как пре-В-клетки, характеризуется реарранжировкой генов тяжелых цепей Ig и экспрессией μ-тяжелых цепей Ig в цитоплазме. На поверхностных мембранах пре-В-клеток определяются антигены CD10, CD19, CD20, CD22, CD24, CD38, CD40, CD72, CD74, CD79a, CD79b, CD81, CD124, CD127, CD135, CD138, CD139.
Для ранних В-клеток следующей стадии дифференцировки В-лимфоцитов характерен синтез тяжелых μ-цепей, κ- и λ-легких цепей с образованием полных молекул IgM, экспрессирующихся на поверхностных мембранах клеток. Одновременно в клетках синтезируется еще один тип тяжелых цепей δ-, на поверхностных мембранах одновременно определяются IgM и IgD. На этой стадии в цитоплазме временно не экспрессируется антиген CD10, синтез которого возобновляется в В-клетках зародышевых центров лимфоидных фолликулов вторичных органов лимфопоэза. На мембранах ранних В-клеток и на последующей стадии дифференцировки В-лимфоцитов, так называемых промежуточных В-клетках, определяются антигены CD19, CD20, CD22, CD24, CD32, CD35, CD40, CD48, CD52, CD72, CD74, CD79a, CD79b, CD99, CD124.
Антигензависимая дифференцировка В-клеток – новый цикл их развития – происходит в тимуснезависимых зонах вторичных лимфоидных органов. Вызываемая антигеном активация и последующая дифференцировка В-клеток приводит к образованию антителообразующих клеток или появлению фенотипически и функционально обособленной популяции долгоживущих В-клеток памяти. Эти процессы происходят под влиянием индуктивного микроокружения вторичных лимфоидных органов (внеклеточного матрикса, стромальных клеток, Т-лимфоцитов, дендритных клеток зародышевых центров лимфоидных фолликулов), с участием цитокинов и молекул клеточной адгезии.

Цитоморфологические признаки и иммунофенотип клеток лимфатических узлов
В структуре лимфатического узла выделяют корковую часть, включающую фолликулы (первичные и вторичные), паракортикальную зону, мякотные шнуры и синусы.
Клетки первичных фолликулов представлены малыми В-лимфоцитами (CD19+ CD20+ CD22+), экспрессирующими поликлональные IgM и IgD (содержащие κ- и λ-легкие цепи). В них обнаруживаются также фолликулярные дендритные клетки (ФДК) с фенотипом CD21+ CD23+ CD35+, относящиеся к категории антигенпрезентирующих клеток.
Вторичные фолликулы состоят из зародышевого центра, начало которому дают В-лимфоциты, подвергшиеся трансформации в IgM+ бласты в паракортикальной зоне, и мантийной зоны, представленной клетками, по цитоморфологическим признакам идентичным обнаруживаемым в первичных фолликулах. IgM+ бласты дифференцируются в sIg-отрицательные центробласты (крупные клетки зародышевых центров фолликулов с нерасщепленным ядром). Ядра центробластов округлой или овальной формы содержат 1-3 ядрышка, локализованные у ядерной мембраны. В клетках этого типа определяется узкий ободок базофильной цитоплазмы. Центробласты дифференцируются в центроциты (клетки центров фолликулов с расщепленным ядром), являющиеся лимфоидными клетками малых или средних размеров со скудной цитоплазмой, в ядрах которых не визуализируются нуклеолы. На поверхностных мембранах центроцитов экспрессируются IgG и IgA. Центроциты могут дифференцироваться в В-клетки памяти или плазматические клетки.
В-клетки, покидающие зародышевый центр, образуют маргинальную зону вокруг периферии мантийной зоны. Клетки маргинальной зоны представлены малыми клетками с ядрами несколько неправильной формы и умеренно широкой цитоплазмой. В маргинальной зоне обнаруживаются моноцитоидные В-клетки, прежде считавшиеся незрелыми гистиоцитами синусов, с относительно крупными овальными или бобовидной формы ядрами и обширной светлой цитоплазмой.
Паракортикальная зона, располагающаяся между фолликулами и распространяющаяся вглубь лимфатического узла, служит местом активации Т-клеток, которые при этом превращаются из малых лимфоцитов в иммунобласты, и В-клеток, происходящей без участия Т-лимфоцитов. При изучении гистологических срезов в паракортикальной зоне выявляются малые лимфоциты, варьирующее количество иммунобластов, интердигитирующие дендритные клетки (ИДК) – антигенпрезентирующие клетки в этой зоне лимфатического узла. ИДК имеют бледно окрашивающиеся ядра овальной или удлиненной формы, иногда с инвагинациями довольно сложной конфигурации, и широкую цитоплазму. При иммуноцитохимическом исследовании в них определяется белок S-100 и антиген HLA-DR.
В паракортикальной зоне обнаруживаются венулы с высоким эндотелием, играющим важную роль в рециркуляции лимфоцитов. Содержащиеся в паракортикальной зоне лимфоциты и некоторые иммунобласты имеют иммунофенотип зрелых Т-клеток (CD2+ CD3+ CD5+ CD1- TdT-). Количество CD4+ лимфоцитов превышает количество CD8+ клеток.
В мякотных шнурах содержатся малые лимфоциты, лимфоциты с признаками плазматизации, иммунобласты, плазматические клетки. Лишь немногие лимфоциты представлены Т-клетками, большинство из них имеет В-клеточное происхождение и характеризуется экспрессией различных классов иммуноглобулинов (IgM, IgD, IgA).
Синусы лимфатического узла (субкапсулярные, кортикальные, медуллярные), в которые через афферентные лимфатические сосуды поступает и из которых через эфферентные вытекает лимфа, содержат гистиоциты синусов и небольшое количество малых лимфоцитов.

Иммунофенотип Т-лимфоцитов на разных стадиях дифференцировки
Т-лимфоциты, ответственные за реакции клеточного иммунитета, осуществляют надзор за генетическим постоянством организма. Они играют важную роль в таких иммунологических феноменах, как резистентность к патогенным микроорганизмам (вирусам, простейшим, некоторым видам бактерий), реакции гиперчувствительности замедленного типа, отторжение аллогенных трансплантатов и реакции «трансплантат против хозяина», развитие аутоиммунных процессов, противоопухолевой реактивности.
В постнатальном периоде ранние Т-клетки-предшественники из костного мозга мигрируют в тимус. Созревание Т-клеток в тимусе, который, как и костный мозг, относится к центральным органам иммунитета, сопровождается последовательным появлением на поверхностных мембранах клеток соответствующих дифференцировочных маркеров.
Обнаруживающиеся в субкортикальной зоне тимуса протимоциты являются бластами крупного или среднего размера с высокой пролиферативной активностью. В ядрах клеток определяется TdT, а на поверхностных мембранах – антиген CD7. Эти клетки бипотентны и дают начало развитию Т-лимфоцитов и ЕК-клеток. На следующем этапе развития Т-клеток в субкортикальной зоне тимуса обнаруживаются так называемые тройные отрицательные (TN) тимоциты, не экспрессирующие антигены CD3, CD4, CD8. По наличию антигенов CD44 и CD25, рецептора фактора роста стволовых клеток (c-kit) они подразделяются на субпопуляции: CD44+ CD25- c-kit+, в которых экспрессируются гены RAG1 и RAG2, но перестройка генов TCR еще не произошла; CD44+ CD25+ c-kit+ клетки, в которых произошла реаранжировка гена TCRd, а затем гена TCRg; CD44- CD25+ c-kit+ с перестройкой β- и α-генов TCR; CD44- CD25- c-kit- клетки – непосредственные предшественники двойных негативных (DN) тимоцитов, экспрессирующие антиген CD3 и TCR при отсутствии антигенов CD4 и CD8.
На TN-тимоцитах по мере их созревания в дополнение к антигену CD7 появляется антиген CD2, а позднее – CD5. На этой же стадии дифференцировки тимоцитов экспрессируются антигены Thy-1 (CD90), CD34, CD45RO, антигены гистосовместимости I и II классов.
В субкортикальной зоне тимуса TN-тимоциты дифференцируются в DN-тимоциты, в которых экспрессируется в цитоплазме, а затем на поверхностных мембранах TCR, нековалентно связанный с полипептидным комплексом CD3. На TCR+ CD3+ DN тимоцитах не обнаруживаются рецептор ИЛ-2 (CD25) и антиген CD44, но определяется экспрессия антигенов CD1a-c, молекул адгезии – CD18, CD29, CD50, CD59, ICAM-1, антигена CD45 (изоформы с молекулярной массой 180 и 190 кД).
Протимоциты, TN-тимоциты и большинство DN-тимоцитов локализуются в субкортикальной зоне тимуса. Основную массу клеток кортикального слоя составляют так называемые двойные положительные (DP) тимоциты. Иммунофенотип этой CD25- CD44- субпопуляции клеток тимуса определяется наличием на поверхностных мембранах антигенов CD3, CD2, CD1a-c, CD5, CD7, CD38, CD52, CD165 и коэкспрессией антигенов CD4 и CD8. На части клеток обнаруживается рецептор трансферрина (CD71). Антиген CD45 представлен изоформами с молекулярной массой 180 и 190 кД, а на немногочисленных клетках – высокомолекулярной изоформой с молекулярной массой 220 кД. Помимо перечисленных выше молекул адгезии, на DP-тимоцитах определяются антигены CD11a, CD49d, CD99.
DP-тимоциты в корковом веществе тимуса подвергаются негативной селекции, которая сопровождается гибелью 80% клеток. Оставшиеся клетки в ходе позитивной селекции утрачивают один из антигенов – CD4 или CD8. На поверхностных мембранах клеток устанавливается связь TCR с молекулой CD4 или CD8, обеспечивающая стабильность взаимодействия TCR и комплекса антиген-молекулы главного комплекса гистосовместимости за счет связи CD4 или CD8 с неполиморфной частью молекул гистосовместимости II или I класса соответственно.
В ходе стимуляции TCR+ DP-тимоциты, попадая в мозговое вещество тимуса, дифференцируются в зрелые эффекторные CD4+ или CD8+ SP-тимоциты с выраженной экспрессией TCR/CD3-комплекса на поверхностных мембранах клеток. На медуллярных SP-тимоцитах определяется экспрессия и других молекул, определяющих в дальнейшем функциональные свойства периферических Т-клеток (СD26, СD27, СD28), происходит смена экспрессии изоформ антигена СD45 (медуллярные тимоциты преимущественно CD45-положительные), возобновляется экспрессия молекул адгезии (CD44).
Созревшие, или «обученные», Т-лимфоциты поступают в кровь и тимусзависимые зоны вторичных лимфоидных органов. Т-клетки, имеющие большую продолжительность жизни, чем В-лимфоциты, составляют преобладающую популяцию лимфоидных клеток в периферической крови. Соотношение клеток с иммунофенотипом Т-лимфоцитов-хелперов и Т-лимфоцитов-супрессоров/цитотоксических клеток (CD4+CD8+) в крови достаточно стабильно и составляет 2,0-2,5:1.

Происхождение и иммунофенотипические признаки клеток-естественных киллеров
Предполагают, что ЕК-клетки происходят из стволовых гемопоэтических клеток. Начальные этапы дифференцировки ЕК-клетки проходят в тимусе. Обнаруживающаяся в этом органе популяция незрелых ЕК-клеток имеет фенотип: TdT- CD2+ CD7+ CD3- CD5- CD4- CD8- CD16- CD38+ CD56+ CD57-.
Наиболее ранним маркером ЕК-клеток является антиген CD56 – молекула адгезии нейронов (N-CAM) с молекулярной массой 175-220 кД, относящаяся к семейству IgSF. В процессе дифференцировки на поверхностных мембранах ЕК-клеток обнаруживаются и другие маркерные антигены – CD57 (HNK1) с молекулярной массой 110 кД, который экспрессируется также на субпопуляции Т-клеток, и CD16 – низкоаффинный Fc-рецептор IgG с молекулярной массой 50-65 кД. На наиболее зрелых ЕК-клетках экспрессируются ξ-цепи CD3, а на части клеток – TCRλ/δ и антиген CD8.
ЕК-клетки связываются с углеводными детерминантами клеток-мишеней с помощью лектиноподобных рецепторов С-типа (CD16, NKRPI, NKp44, NKp46). Наряду с указанными активационными рецепторами на мембранах ЕК-клеток выявляются и так называемые киллингингибирующие рецепторы (KIR), блокирующие лизис мишеней (NKp58, NKp70, NKp140, CD94, NKG2D). По крайней мере, часть ЕК-клеток по цитоморфологическим признакам (наличие азурофильной зернистости в цитоплазме) относится к категории больших гранулосодержащих лимфоцитов.